kitame skyriuje, mes aptarti fluorescencijos mikroskopijos išsamiau.
Bandinių paruošimas
Kai stebint prieš šviesą pavyzdį, šviesa turi praeiti pro pavyzdį siekiant suformuoti vaizdą. Kuo storesnis egzempliorius, tuo mažiau šviesos kerta. Kuo mažiau šviesos, kad eina per, tamsesnis vaizdas. Todėl, bandiniai turi būti plonas (0,1-0,5 mm). Daugelis gyvais egzemplioriais turi būti supjaustyti plonomis skyriuose prieš stebėjimu. Mėginiai uolienos ar puslaidininkiai yra per storas būti suskirstyta ir pastebėjo šviesą, todėl jie pastebėjo šviesa atsispindi nuo jų paviršių.
Fluorescencinis mikroskopija
fluorescencijos mikroskopijos naudoja gyvsidabrio arba ksenono lempa Gaminame ultravioletinę šviesą. Šviesa ateina į mikroskopą ir hitai dichroiczny veidrodis - veidrodis, kuris atspindi vieną bangų ilgio diapazone ir leidžia kito asortimentas pro. Dichroiczny veidrodis atspindi ultravioletinę šviesą iki pavyzdį. Ultravioletinė šviesa sužadina fluorescenciją per molekulių pavyzdį. Objektyvą renka fluorescencinė bangos ilgio šviesą, pagamintą. Tai fluorescencinės šviesos praeina pro dichroinius veidrodį ir kliūčių filtru (kuris pašalina išskyrus fluorescencinė bangos), todėl jį į okuliaro suformuoti vaizdą.
liuminescencinės molekulių pavyzdį galima arba susidarantys natūraliu ar būti įvesta , Pavyzdžiui, galite ištepti ląsteles dažo pavadino chalceino /val. Pati ši dažų nėra fluorescencinė. AM dalis molekulės slepia iš chalceino molekulė, kuri jungiasi kalcio, kuris yra fluorescentinis porcija. Kai jūs sumaišykite chalceino /esu su tirpalas maudymosi ląsteles, dažų kerta į ląstelę. Gyvenamoji ląstelės turi fermentą, kuris pašalina AM dalį, sulaiko chalceino ląstelės viduje ir leidžia chalceino surišti kalcį, kad jis švyti žaliai ultravioletinėje šviesoje. Negyvų ląstelių nebereikia šį fermentą. Todėl gyvų ląstelių bus švyti žaliai, o negyvų ląstelių nebus švyti. Jūs galite pamatyti negyvas ląsteles patį bandinį, jei maišyti kitoje dažų vadinamas propidiumo jodido, kuris įsiskverbia tik negyvas ląsteles. Propidiumo jodidas jungiasi prie DNR į branduolį ir švyti raudonai ultravioletinėje šviesoje. Šis dvigubas dažo metodas yra naudojamas toksiškumo tyrimų, siekiant nustatyti ląstelių populiacijos, kuri yra žuvo, kai gydoma su tam tikru aplin
